細菌分離純化

培養(yǎng)基配制

1． 用來稱量酵母膏，海水晶的燒杯和溶解藥品的鐵杯，玻璃棒記得要用蒸餾潤洗。

2． 如果沒有陳海水，就用海水晶配，濃度在2~3％之間。一般我們選擇2.5％

3． 記得要在加瓊脂粉之前調(diào)PH值到7。6～7。8

4． 配2216E培養(yǎng)基要用“純化瓊脂粉（細菌級）”

5． 配好培養(yǎng)基要及時滅菌，分裝時用500ml錐形瓶裝200ml培養(yǎng)基，不宜裝得過多，因為該培養(yǎng)基容易沸騰。

6． 分裝用的錐形瓶也要預先配制。

涂布平板

1． 提前滅好涂棒，無菌水。

2． 涂布是加0.1Ml 樣液，再根據(jù)平板的干燥程度加無菌水或滅過菌的生理鹽水，涂6~10圈后樣液和水都能被吸收，一般加無菌水的量在100～500ul之間。所選平板是已預先放置了2天左右。

3． 涂布時可預先灼燒另一根涂棒，放在一邊冷卻。

4． 平板要到扣培養(yǎng)。

5． 合理選擇稀釋度

倒平板

1． 如果要準備大批量的平板，一定要先確定有足夠的已滅菌的培養(yǎng)皿。

2． 如不能及時倒，可將冷凝后的培養(yǎng)基再次加熱化開，稍冷卻后倒平板。

3． 倒好的平板在無菌室先放一段時間讓它冷凝，如果有大批量平板，在晚上倒平板，第二天早上再收好。這樣就不會影響其他人使用無菌室。

4． 平板不宜太干也不宜太濕。若太濕，可將平板放到無菌室，若太干，可將平板用塑料袋包住并放在陰涼處，以減少水分的蒸發(fā)。

5． 未使用的平板不與已使用的平板放在一處，因為這樣染菌的幾率就會增大。

6． 如果有條件，可以將平板放在培養(yǎng)箱里預培養(yǎng)1～2天，篩選掉長雜菌的平板。

計數(shù)

1． 可用描點法計數(shù)，即數(shù)一個菌落，就在該菌落上點一個小圓點。

2． 如果平板上的菌落數(shù)太多，可計數(shù)平板的一半或4分之一，再乘以相應的倍數(shù)。

轉(zhuǎn)接劃線

1． 如果要挑的菌落很小，而且又長得慢，菌落全部粘到接種環(huán)上，劃線時可適當增加第二梯度線的寬度和劃線數(shù)，因為當菌少時，拉不開4個梯度，而第二梯度可較好的分離出單菌落。

2． 如果要挑的菌落很大，而且又長得快，可挑菌少些，*梯度線要多劃幾下，且占地要小。第二梯度線劃得少且密一些，第三和第四梯度線則劃得多且疏，因為這些菌主要靠第三和第四梯度線分離單菌落。第二梯度2～3條線與*梯度線連接，第三與第二梯度線也是2～3條線連接。在第二與第三梯度劃線前將接種環(huán)灼燒冷卻，這樣可燒死粘在接種環(huán)上的細菌。

3． 接種環(huán)可用兩個輪流劃，一個在劃時另一個就可以放在一邊冷卻。

4． 如果平板是用來計數(shù)的，則將字寫在培養(yǎng)皿的蓋子上。

5． 經(jīng)常觀察平板的長勢，當菌落長的差不多時就將他從培養(yǎng)箱中拿出 ，防止菌落長得太快，單菌落連在了一起。