詳情請(qǐng)看：豬瘟單克隆抗體ELISA

一、材料及試劑

1、豬瘟單抗純化抗原

2、兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體

3、豬瘟陽性血清

4、豬瘟陰性血清

1～4均由的生物制品所購買。 

二、操作方法

1、用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強(qiáng)毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋，每孔包被100µl，4℃濕盒過夜。

2、次日取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′沖洗。

3、將待檢血清以PBS液做400倍稀釋，每孔加100µl同時(shí)將豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋，于對(duì)照孔中加100μl.37℃溫育1.5h～2h。

4、重復(fù)第二步，取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′洗滌。

5、將兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體以PBS液做100倍稀釋，每孔加100μl，37℃溫育1.5h～2h。

6、重復(fù)第4步。

7、每孔加底物溶液100µl，室溫下觀察顯色反應(yīng)。當(dāng)陰性對(duì)照孔稍顯色時(shí)，立即終止反應(yīng)，并以陰性孔做空白對(duì)照。

8、每孔加終止液50µl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)的光密度。

三、結(jié)果判定

在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上，OD≥0.2，為豬瘟弱毒抗體陽性；OD＜0.2，為豬瘟弱毒抗體陰性。

在豬瘟強(qiáng)毒酶聯(lián)板上，OD≥0.5，為豬瘟強(qiáng)毒抗體陽性；OD＜0.2，為豬瘟強(qiáng)毒抗體陰性。