人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。 往預(yù)先包被人抑瘤素M（OSM）
捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。
用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的人抑瘤素M（OSM）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 
值），計(jì)算樣品濃度。 
樣本處理及要求
1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，
或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，
或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃
或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。 
人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室
溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中
不要讓微孔干燥掉。 
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。 
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。 
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。 
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞
試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 
9. 不能使用過期產(chǎn)品。 
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。 
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。 
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。 
操作步驟
1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL； 
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本 50μL；空白孔不加。 
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體
100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。 
6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 
7.每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測(cè)定各孔的 OD 值。 
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 
以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪
制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。 
試劑盒性能
1.檢測(cè)范圍：10 pg/mL – 320 pg/mL。 
2.靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于 1.0 pg/mL。 
3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 
4.人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。